1、胰酶消化過(guò)度
在用胰酶消化細胞使其不貼壁的時(shí)候，如果消化時(shí)間過(guò)長(cháng)，會(huì )導致細胞膜表面蛋白也被破話(huà)，嚴重者可致細胞破碎、死亡。所以胰酶消化不宜過(guò)久。如果消化了好久（具體消化時(shí)間視細胞而定）在鏡下看還有很多細胞貼壁，可能是胰酶消化力弱。增強胰酶消化能力的方法：消化前用PBS洗以去除血清中的各種蛋白；在胰酶中加入EDTA；在消化前胰酶37攝氏度預熱。
2、傳代比例太低
細胞在培養基中生長(cháng)的時(shí)候，除了外源營(yíng)養物質(zhì)，其自身也會(huì )分泌促進(jìn)生長(cháng)的物質(zhì)。如果一個(gè)皿中細胞數量太少，細胞分泌的營(yíng)養物質(zhì)支撐不了“一大家子”的細胞，細胞狀態(tài)就不好。不要因為偷懶而減少傳代比例，以及細胞懸液要吹打均勻讓傳代的細胞就是你要的比例。
3、污染
在（xi 菌或真jun）污染的早期，還未出現明顯的細胞外形被嚴重破壞、培養基變黃的時(shí)候，細胞可能出現大量死亡、形狀怪異、有大團細胞簇擁的現象。這時(shí)候你再養一兩天，就能看到細胞變成馬賽克（xi 菌污染）或者培養基肉眼可見(jiàn)渾濁有絮絮（真jun污染）。