血清的熱滅活是很多培養者感興趣的話(huà)題,價(jià)格不菲的血清中含有諸如生長(cháng)因子,維生素,氨基酸等珍貴物質(zhì),而將它們置于50℃以上的溫度長(cháng)達30分鐘是完全沒(méi)有必要的。盡管如此,在大多數實(shí)驗室之中血清的熱滅活還是作為常規來(lái)執行,多數實(shí)驗者并沒(méi)有考慮熱處理對血清中的生長(cháng)因子,氨基酸等成分帶來(lái)的負面影響,在我們的技術(shù)專(zhuān)線(xiàn)中*常被提到的就是否該對血清進(jìn)行熱滅活,下面我們就對胎牛血清的熱滅活進(jìn)行一些探討和解釋。
根據調查,至少70%的研究者對血清的滅活僅僅是因為遵照常規操作,或者說(shuō)認為是理所當然的。常規滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等.其中*chang用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著(zhù)血清采集、處理、加工工藝的提高,許多早先認為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立,只有少數對血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性。
熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì),但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒(méi)有必要。有科研人員曾對商業(yè)胎牛血清中的補體成分進(jìn)行測定,他們發(fā)現胎牛血清中含有的C1,C6僅達成年動(dòng)物血清的1-3%,而其它補體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%,至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過(guò)補體固定實(shí)驗,我們也在多個(gè)不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結果。即使是在未稀釋的血清中,也未發(fā)現有明顯的溶血現象。另外,多數實(shí)驗室在培養前將培養液進(jìn)行預熱的過(guò)程,也對熱敏的補體有滅活的作用。
在對補體滅活以外,熱處理同時(shí)也對血清中可能存在的支原體具有滅活作用。多年以前,450納米孔徑的濾膜被用于加工血清時(shí),血清中支原體的污染時(shí)有發(fā)生。針對這個(gè)問(wèn)題,HyClone使用100納米三層濾膜連續濾過(guò)技術(shù),自從采用這項技術(shù)以及后來(lái)的40納米濾過(guò)技術(shù)之后,我們的血清產(chǎn)品中沒(méi)有再發(fā)現有支原體的污染,也是使得熱滅活成為不必要的另外一個(gè)原因。
Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化,有研究結果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細胞的促粘附作用,在用SV-BHK、BALB-3T3、CV-1、FS-4細胞對細胞粘附實(shí)驗中,熱滅活對胎牛血清的影響小于對小牛血清的影響。