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原代細胞的提取的整個(gè)操作過(guò)程

原代細胞的提取的整個(gè)操作過(guò)程:

1. 整個(gè)操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺下進(jìn)行,所有的器件要高壓消 毒。

2. 依據BALB/c小鼠的體重,用10ml/kg3%濃度的麻醉;將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內,這一步不只能夠消 毒,也能夠讓小鼠體毛浸濕,后續剃去皮毛的時(shí)分不會(huì )沾到剪刀或安排上。

3. 用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟,裝有PBS的注射器刺進(jìn)心尖,同時(shí)在右心耳處剪開(kāi)一個(gè)小口,緩慢推進(jìn)注射器,隨著(zhù)心臟的跳動(dòng),將體內的血液沖洗出來(lái)。

4. 取出小鼠的肺部安排,將肺安排切成小米粒樣的巨細,置于預冷的HBSS中反復沖洗幾回。

5. 將小米粒巨細的肺安排置于培育瓶中(培育瓶前1天用1%明膠溶液包被培育面,4度過(guò)夜,小鼠處理前,將培育瓶放置培育箱中,使其溫度恢復至37度),置于培育箱37度的環(huán)境下,消化4個(gè)小時(shí)。

6. 消化4小時(shí)后,參加RPMI1640培育基(有10%血清、1%雙抗、1%內皮細胞成長(cháng)因子)10ml(*增加培育基,能夠是正常培育時(shí)的2倍量),持續培育24小時(shí)(持續培育的時(shí)刻可依據細胞貼壁狀況適當調整)。

7. 24小時(shí)后,取出肺安排,鏡下觀(guān)察細胞狀態(tài),換液。

8. 原代細胞的提取和培育是很慢的過(guò)程,一般需比及24小時(shí)后,才能在鏡下看到些許細胞群,一周到兩周后才會(huì )看到鵝卵石樣的擺放狀況。

9. 原代細胞2-3天換液一次,由于內皮細胞成長(cháng)形成單層時(shí),會(huì )出現接觸抑制現象。所以,內皮細胞成長(cháng)挨近單層時(shí)就能夠傳代了,不要比及長(cháng)得非常滿(mǎn)。

原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學(xué)和生物醫學(xué)基礎研究,如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學(xué)研究等,還可應用于當今熱門(mén)的生物醫藥產(chǎn)業(yè)如藥 物篩選、藥 物代謝和毒理研究、癌癥藥 物的研究等。

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