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紫外光吸收法測定蛋白濃度試驗程序

紫外光吸收法測定蛋白濃度：
1．用品和儀器：紫外分光光度劑，微量自動(dòng)取液儀。
2．試劑：標準蛋白質(zhì)溶液：準確稱(chēng)重的純凈蛋白質(zhì)，配成1mg/ml儲液置于4度中備用。
0.1mol/l磷酸緩沖液，PH7.4;0.1mol/l磷酸緩沖液，PH12.0。
3.試驗程序：
1），在2個(gè)潔凈干凈的石英比色杯中（內徑1cm）中加入蒸餾水或其他用于溶解標準蛋白質(zhì)與待測樣品的緩沖液，其中一個(gè)作為參比杯（在以后測量不變），另一個(gè)作為樣品杯，放入分光光度劑的相應位置。
2），記錄下空白杯在280260nm處的光吸收值，或對之進(jìn)行250－350nm波長(cháng)范圍的基線(xiàn)掃描。
3），移去樣品比色杯中的蒸餾水或是緩沖液，干燥比色杯（用濾紙吸取殘液）。
4），在樣品比色杯中加入待測樣品液，在實(shí)驗中提取樣品30ul加入2970ul雙證水，混勻，樣品液事先通過(guò)離心或用0.2um孔徑的濾膜過(guò)濾。
5），重復2步驟
6），蛋白含量計算：蛋白濃度（mg/ml）=1。55A280—0.76A260

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