ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結合，此種結合不會(huì )改變抗體的免 疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型，出現顏色反應。因此，可通過(guò)底物的顏色反應來(lái)判定有無(wú)相應的免 疫反應，顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過(guò)ELISA檢測儀進(jìn)行定量測定，這樣就將酶化學(xué)反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合起來(lái)，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。
注意事項：
1、操作前應對實(shí)驗的物理參數有充分的了解，如環(huán)境溫度(保持在18 C~25℃)、反應孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數等，要先查看水育箱溫度，是否符合要求。
2、正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺，血清殘留在反應孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說(shuō)明書(shū)一致，否則可導致結果錯誤，實(shí)驗重復性差。
3、手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大，洗滌次數不要超過(guò)說(shuō)明書(shū)推薦的洗滌次數，洗液在反應孔內滯留的時(shí)間不宜太長(cháng)。不要使洗液在孔間竄流，造成孔問(wèn)污染，導致假陰性或假陽(yáng)性。
4、要保證加液量一致 我們在使用時(shí)感覺(jué)滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準，造成顯色不統一，判斷錯誤。
5、顯色液量不可過(guò)多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下，加顯色系統后要避光反應，顯色液量不能過(guò)多，以免顯色過(guò)強。
6、試劑的影響因數:應選用有*批準文號，質(zhì)量靠得住的產(chǎn)品，不能圖便宜，忽視質(zhì)量保證。試劑應妥善保存于4℃冰箱內，在使用時(shí)先平衡至室溫，不同批號的試劑組分不宜交叉使用。試劑開(kāi)啟后要在一周內用完，剩余的試劑下次用時(shí)應先檢查是否變質(zhì)，，顯色劑如被污染變色將造成全部顯色，導致錯誤結果。過(guò)期的試劑不宜再用，若別無(wú)選擇，應做好雙份質(zhì)控品的監測，確保結果的可靠性。