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細胞周期的測定操作步驟

細胞周期的測定操作步驟


1、細胞生長(cháng)至指數期時(shí),向培養液中加入BrdU,使終濃度為10μg/ml。


2、44小時(shí)加秋水仙素,使每ml中含0.1μg。


3、48小時(shí)后常規消化細胞至離心管中,注意培養上清的漂浮細胞也要收集到離心管中。


4、常規染色體制片(見(jiàn)第三部分:染色體技術(shù))。


5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC 液,距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。


6、棄去2×SSC液,流水沖洗。


7、Giemsa液染色10分鐘,流水沖洗,晾干。


8、鏡檢100個(gè)分裂相,計、二、三、四細胞期分裂指數。


9、計算: 細胞周期(Tc)=48/{(M1+2M2+3M3+4M4)/100}(小時(shí))


附:(1)BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml 4℃下避光保存。


(2)2×SSC配制: NaCl 1.75克,檸檬酸三鈉•2H2O 0.88克,加水至100ml,4℃保存。




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