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?蛋白質(zhì)印跡(WB)灌膠與上樣

WB,蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)又稱(chēng)免 疫印跡(immunoblotting),是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。
灌膠與上樣:
1. 玻璃板對齊后放入夾中卡緊。然后垂直卡在架子上準備灌膠。
2. 配 10% 分離膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。灌膠時(shí),可用10ml槍吸取5ml 膠沿玻璃放出,待膠面升到綠帶中間線(xiàn)高度時(shí)即可。然后膠上加一層水,液封后的膠凝的更快。
3. 當水和膠之間有一條折射線(xiàn)時(shí),說(shuō)明膠已凝了。再等3min使膠充分凝固就可倒去膠上層水并用吸水紙將水吸干。
4. 配 4% 的濃縮膠, 加入 TEMED 后立即搖勻即可灌膠。將剩余空間灌滿(mǎn)濃縮膠然后將梳子插入濃縮膠中。待到濃縮膠凝固后,兩手分別捏住梳子的兩邊豎直向上輕輕將其拔出。
5. 用水沖洗一下濃縮膠,將其放入電泳槽中。
6. 在電泳槽的上、下槽中加入1×Tris-甘氨酸或SDS電泳緩沖液,上樣。
7. 連接電泳槽到電泳儀。上槽接負極,下槽接正極,通電起始電壓70~ 80V,10min后100V,電泳2h或當溴酚藍遷移至離底部1cm時(shí),停止電泳。


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