ELISA浸泡式手工操作過(guò)程:
1.吸干或甩干孔內反應液;
2.用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿(mǎn)板孔后,即甩去);
3.浸泡,即將洗滌液注滿(mǎn)板孔,放置1~2分鐘,間歇搖動(dòng),浸泡時(shí)間不可隨意縮短;
4.吸干孔內液體。吸干應徹底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;
5.重復操作步驟3和4,洗滌3~4次(或按說(shuō)明規定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數或延長(cháng)浸泡時(shí)間。
微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結合,并借助于親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質(zhì)回復到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。
洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%~0.2%之間,高于0.2%時(shí),可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。