細胞凍存和復蘇的zui 佳時(shí)間:
細胞在體外生長(cháng)期間,通常分為三個(gè)階段:潛伏期、指數生長(cháng)期和平臺期。潛伏期通常是細胞剛剛傳代,此時(shí)細胞開(kāi)始貼附基質(zhì)和伸展骨架,代謝活動(dòng)集中在粘附蛋白和骨架蛋白的表達,細胞數量在這段時(shí)間內幾乎沒(méi)有增加。
隨后,細胞開(kāi)始指數生長(cháng)期,轉錄翻譯過(guò)程旺盛,胞內物質(zhì)、信號傳遞迅速,細胞數量迅速增長(cháng)。如果在這個(gè)時(shí)期凍存,實(shí)際上是強行將細胞凍結在代謝的某一時(shí)刻,勢必造成對解旋的DNA、轉錄翻譯中的RNA和蛋白的機械損傷,增加個(gè)別環(huán)節發(fā)生錯誤的風(fēng)險。
隨著(zhù)細胞數量的增長(cháng),培養容器內,細胞匯合達到90%以上。大部分細胞因為“接觸抑制”而停止高速代謝和增殖,胞內活動(dòng)趨于平緩。所以,建議在剛剛進(jìn)入平臺期時(shí)凍存細胞,既可以獲得足量的細胞,也不會(huì )對細胞造成過(guò)多的機械損傷。