分享下流式細胞術(shù)鑒定表面抗原的實(shí)驗流程:
1．用6孔板培養細胞，待細胞生長(cháng)達到60%-70%，棄掉舊培養基。收集對應細胞培養基到一離心管內備用。
2．用0.25%胰酶消化細胞，至細胞變圓，加入前面收集的細胞培養基，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞，收集到離心管內（注意：懸浮細胞不需要胰酶消化，直接收集到離心管即可）。
3．200g離心5min，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長(cháng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。
4．小心吸去上清，可以殘留約50μl的培養基。
5．加入約1ml預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5ml離心管內。再次離心沉淀細胞，小心吸去上清，可以殘留約50μl PBS。
6．輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。
7．在每個(gè)流式檢測管或板式微孔中加入50μl的稀釋后的抗體（抗體用Staining Buffer稀釋成合適的濃度）；在空白管/孔或同型對照管/孔中加入50μl Staining Buffer。若進(jìn)行抗體*佳濃度測試，建議范圍2-0.03μg/106細胞。
8．在各管/孔中分別加入50μl細胞懸液（約106細胞），并輕輕混勻。
9．避光冰浴或在4℃冰箱中孵育20min。孵育完成后，加入Staining Buffer（每流式檢測管中加2ml，而每微孔中加200μl）。
10．200g 4℃離心5min，并棄去上清，重復洗滌過(guò)程3次。100μl PBS重懸細胞后上流式儀檢測。